细胞与分子生物学常用实验技术

内容简介全书共分11章。第一章讲述了细胞学常用的实验技术，第二章至第十一章则重点阐述了分子生物学常用的实验技术。本书有以下几个特点：一是编写人员大部分为在读的博士研究生，对所写的实验技术非常熟悉，而且对实验技术有着自己独特的见解；二是所涉及内容均是最常用而且成熟的实验方法；三是侧重于实验的具体操作、注意事项以及个人的体会；四是从初学者的角度出发，符合初学者的需要，也可为从事基础医学研究的人员提供帮助；五是在本书中，每一章节都附有作者的联系方式，若遇到相关问题，可以与作者进行交流。目录第一章细胞及组织学常用实验技术
　第一节细胞冻存
　第二节细胞复苏
　第三节细胞计数法测定生长曲线
　第四节MTT法测定生长曲线
　第五节平板克隆形成实验
　第六节软琼脂克隆形成实验
　第七节Transwell
　第八节细胞周期的测定
　第九节细胞凋亡检测
　第十节裸鼠移植瘤动物模型
　第十一节真核转染
　第十二节免疫组织化学及免疫细胞化学
　第十三节福尔马林固定石蜡包埋组织的原位荧光杂交方法
　第十四节临床标本收集方法
第二章PCR技术　
　第一节RT—PCR
　第二节荧光定量PCR
第三章分子克隆常用技术
　第一节感受态的制备
　第二节转化
　第三节质粒提取
　第四节琼脂糖凝胶电泳
　第五节凝胶回收
　第六节重组DNA的构建
第四章病毒载体的构建
　第一节复制缺陷型腺病毒载体的构建
　第二节慢病毒载体的包装
第五章RNAi技术
第六章蛋白原核表达与纯化
第七章酵母双杂交筛选相互作用蛋白及验证
　第一节基本原理及应用
　第二节酵母双杂交实验的基本流程
　第三节酵母双杂交实验具体实验步骤
第八章western—blot
第九章转录调控机制研究的策略
第十章基因组DNA提取及甲基化分析
第十一章实验研究中基本的生物信息学技术书摘插图第一章　细胞及组织学常用实验技术
　　第一节细胞冻存
　一、基本原理及实验目的
　细胞冻存是通过向培养液中加入保护剂，减少冻存过程中细胞内冰晶形成，来保护细胞，是保存细胞的最基本方法。
　二、主要仪器及试剂
　1.0.25％胰蛋白酶：称取胰蛋白酶粉末0.259，加入100mlPBS，充分溶解后过滤除菌备用，4℃保存。
2.含20％胎牛血清的培养液：将培养液和胎牛血清按4：1比例混合，过滤除菌备用，4℃保存。
3.细胞冻存液：含20％胎牛血清的培养液和DMSO按照9：1比例混合，备用。
4.弯头滴管、移液器及枪头、冻存管等。
三、操作步骤(以贴壁生长的细胞为例)。
1.取对数生长期的细胞，当细胞增殖至培养瓶底(25cm2培养瓶为例)80％时，用弯头滴管吸出培养基。
　2.加入1ml胰蛋白酶，洗涤1次后弃去瓶中液体。
　3.重新加入1ml胰酶，消化细胞。
　4.倒置显微镜下观察，当细胞变圆并有部分细胞脱壁后，加入1ml含有血清的培养基终止消化。
　5.用滴管吸取瓶中液体轻轻吹打培养瓶底，使细胞完全脱壁。
　6.将细胞悬液移人离心管，800rpm离心5min。
　7.弃去离心管中液体，加入培养基2ml，用滴管轻轻吹打，使细胞重悬。
8.800rpm离心5min。
9.用滴管吸去离心管中液体。
10.加入1Illl细胞冻存液，重悬细胞。
11.将细胞悬液移入冻存管中，4℃放置30min。
12.-20℃放置2h；-70℃过夜。
13.放入液氮中保存。
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170000版　　次：1页　　数：262印刷时间：2009-7-1开　　本：32开印　　次：1纸　　张：胶版纸
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